USCAP摘要分类汇总三H

ER/PR,HER2等基因对于乳腺癌预后和治疗的重要性早已明确，其诊断标准也已经通过多版指南进行了规范。但是，这并不影响病理学家对新的检测方法/标准的探索和思考，本年度USCAP汇编共收录6篇以HER2阳性为主要内容的研究摘要。

不同HER2-FISH阳性模式的浸润性乳腺癌对曲妥珠单抗新辅助治疗的疗效观察

背景：HER2阳性乳腺癌患者可能有不同的HER2/CEP17比值和HER2拷贝数。HER2阳性乳腺癌患者接受新辅助治疗联合曲妥珠单抗治疗的结果也不同。我们的目的是确定不同组HER2FISH阳性结果与曲妥珠单抗联合新辅助治疗患者的病理完全反应（PCR）之间的关系。

设计：例HER2阳性浸润性乳腺癌患者接受曲妥珠单抗联合化疗的新辅助治疗。根据FISH结果将例患者分为3组。第一组：HER2/CEP.0，HER2拷贝数≥6.0；第二组：HER2/CEP17≥2.0，HER2拷贝数≥4.0且＜6.0；第三组：HER2/CEP17≥2.0，HER2拷贝数≥6.0。分析三组新辅助治疗的疗效。

结果：例中浸润性导管癌例，浸润性微乳头状癌1例。管腔B型58例（58/,50.9%），HER2过表达型56例（56/,49.1%）。FISH第一组共9例，其中管腔B型3例（3/9,33.3%），HER2过表达型6例（6/9,66.7%）。FISH第二组21例，其中管腔B型13例（14/21,66.7%），HER2过表达型7例（7/21,33.3%）。FISH第三组84例，其中管腔B型41例（41/84,48.8%），HER2过表达43例（43/84,51.2%）。三组间分子亚型差异无统计学意义（χ2=3.，P=0.）。共有33例（33/，28.9%）获得病理完全缓解（pCR），81例（81/，71.1%）为非pCR。按Miller-Payne分级，5级39例（39/，34.2%），其中6例腋窝淋巴结仍有癌细胞残留。1～4级75例（75/，65.8%）。FISH第一组中4例（4/9,44.4%）获得pCR，5例（5/9,55.6%）未获得pCR。FISH第二组只有1例（1/21，4.8%）获得pCR，20例（18/21，95.2%）未获得pCR。FISH第三组中pCR阳性28例（28/84,33.3%），非pCR阳性56例（56/84,66.7%）。第二组新辅助治疗的pCR率明显低于其他两组，三组间差异有统计学意义（χ2=8.，P=0.）。

结论：尽管HER2-FISH结果均为阳性的浸润性乳腺癌，但与其他组相比，HER2/CEP17≥2.0、HER2拷贝数≥4.0且6.0的患者对含曲妥珠单抗的新辅助治疗反应较差。这组患者的生物学特性值得进一步研究。

伴有罕见HER2过表达的低级别早期乳腺癌的临床病理及分子特征

背景:过表达HER2基因的乳腺癌较HER2阴性病例，通常具有高核级和更具侵袭性的临床表型，比起管腔A型和B型，在较低pT及pN分期时即需要化疗和HER2的靶向治疗以取得类似的预后。因此，鉴别出HER2驱动的癌非常重要。HER2阳性的病例很少出现低级别，这种特殊情况的临床病理和分子机制有待研究。

设计：22例粗针活检，通过免疫组化和/或FISH证实HER2阳性，Nottingham1级的浸润性癌，激素受体检测采用免疫组化，组织学评估由两名病理医生独立进行。其中14例进行基因组测序，检测含个基因全编码序列，统计突变和拷贝数变异（CNVs）。不同组的分子改变频率和临床病理特征，采用Fisher精确检验进行比较。

结果：中位年龄57岁，81%的肿物为浸润性导管癌，86%的大小＜2cm（见图1）。8例（36%）在切除时淋巴结阳性（浸润4例，微浸润4例）。5例在切除时变为Nottingham2级。切除标本的HER2状态没有改变。只有1例ER不是阳性。一半多（54%）的病例接受了HER2靶向治疗，无一病例复发或死亡，中位随访时间天。14例中有3例出现ERBB2基因拷贝数增加（gain），7例出现ERBB2基因扩增（amplification），未检测到ERBB2基因的点突变。43%PIK3CA和21%TP53出现基因改变，为这一队列最常见的致病基因改变（图2）。然而这些基因变化与临床和病理特征之间无显著的统计相关性。Blueprint分子亚型分析正在处理中。

结论：据我们所知，这是首次也是最大的HER2阳性早期乳腺癌的NGSpanel检测。结果证实大部分肿物的HER2阳性出现ERBB2拷贝数变异。少数病例缺乏明显的ERBB2基因改变，提示肿瘤可能存在的异质性，或可能存在引发HER2蛋白过表达的替代途径。这些需要进一步研究，以明确哪些患者可以免除HER2靶向治疗及其相关毒性。

双重检测细胞外和细胞内域揭示了HER2/ERBB2同工型表达的不同模式，具有机理和治疗意义

背景：p95HER2是由蛋白酶的选择性剪接或翻译后修饰产生的一种HER2同工型。p95HER2可以通过胞内酪氨酸激酶结构域诱导下游信号通路的持续性活化。此外，截短的胞外域（ECD）导致曲妥珠单抗结合域丧失，引起耐药性。

目前对HER2测试的建议集中于通过免疫组织化学（IHC）检测HER2的胞内结构域（ICD）和通过荧光原位杂交技术扩增HER2DNA，而没有针对p95HER2的检测标准。在HER2+肿瘤中经常观察到p95HER2的存在，但是通过选择性剪接或蛋白酶活化产生的p95HER2的比例及其在肿瘤中的克隆分布状态尚不清楚。因此，加州大学戴维斯分校MichaelHsieh等试图评估HER2+乳腺癌中ECD丢失的模式。

设计：从加州大学戴维斯分校收集了39例HER2+病例，这些病例均经过了HerceptestIHC和Pathvysion双色FISH的预先测试。HER2的ECD和ICD通过基于荧光的IHC进行可视化，并使用多光谱成像显微镜进行成像分析。ECD和ICD同时阳性判断为全长HER2，仅ICD阳性判断为p95HER2。

结果：多重IHC显示了四种不同的模式：“模式1”是全长HER2（FL-HER2），同时具有ECD和ICD；“模式2”完全性p95HER2，仅对ICD呈阳性。“模式3”是分别存在p95HER2和FL-HER2亚克隆，呈混合性肿瘤；“模式4”是病变内同时表达p95HER2和FL-HER2，为不同水平ECD的混合物。具体分布为：28.2％（模式1），12.8％（模式2），28.2％（模式3）和30.7％（模式4）。

结论：我们有效地显示：HER2免疫组化阳性(Herceptest检测)病例中的模式2、3和4具有ECD结构域丢失。由于p95HER2对曲妥珠单抗耐药具有提示作用，因此在当前的临床工作流程中增加有效的p95HER2检测方法很重要，它应有助于确定靶向p95HER2的更好的治疗选择，例如：特异性抑制HER2酪氨酸激酶结构域或新型靶向p95HER2的新表位和/或N末端的策略。

84HER2是否影响乳腺癌中CDK4/6通路活性？

背景：细胞周期蛋白D1-CDK4/6-pRb是促进细胞周期从G1期发展到S期从而导致细胞增殖的途径。CDK4/6抑制剂与CDK4/6结合，从而防止癌症进展。在临床上，它们已被证明对ER+乳腺癌有益，尤其是与抗雌激素疗法联合使用时。HER2和细胞周期蛋白D1-CDK4/6-pRb途径之间的关系尚未得到很好的认识。此项研究将磷酸化的Rb（pRb）视为CDK4/6激活的指标，研究其表达与HER2表达及基因拷贝数的关系。

设计：该研究收集例乳腺浸润性癌活检标本，其中HER2+77例（ER+PR±HER2+39例，ER-PR-HER2+38例），HER2-（ER-PR-HER2-）53例。对pRb进行免疫染色，用H-score(强度x阳性细胞百分比)进行量化。

结果：所有病例的H值都在3~分之间(表1)。ER-PR-HER2-、ER-PR-HER2+、ER+PR±HER2+组的平均H值分别为61.5±18.1、.82±25.0、93.1±22.2。所有HER2+病例的平均值为.5±16.7分，显著高于HER2-病例(p=0.)。两个HER2+亚组之间无显著差异(图1)。HER2基因拷贝数与相应的H-score，也存在着正相关的趋势，即HER2拷贝数越高，H-score越高，尽管没有统计学意义(r=0.2,p=0.09)(图2)。

结论：HER2+组中pRb表达的显著升高，表明HER2表达增加可能导致CDK4/6途径活化。HER2基因拷贝数与pRb表达之间呈正相关，为此趋势提供了进一步的证据。CDK4/6抑制剂在治疗HER2+乳腺癌中具有潜在作用，HER2靶向治疗与CDK4/6抑制剂可能存在协同作用。未来对pRb表达与CDK4/6抑制剂反应的研究，对于确认pRb是否可以作为CDK4/6抑制剂治疗的预测生物标志物具有重要意义。有趣的是，少数ER-PR-HER2-病例的H评分也较高（7.5%，H评分），如果证实的话，这些患者也可能对CDK4/6抑制剂有反应。

ISH第2组（HER2/CEP17比率≥2.0和HER2平均拷贝数4.0）浸润性乳腺癌的临床和病理学特征

背景：年，ASCO/CAP更新了HER2测试指南，以解决使用双探针原位杂交（ISH）非常见结果的判断。当相应的HER2免疫组织化学（IHC）为0、1+或2时，HER2/CEP17比率=2.0但平均HER2拷贝数4.0信号/细胞的患者（ISH第2组）不再被认为具有抗HER2治疗的资格。ISH组2的结果很少见，在HERA试验入组病例中仅占0.8％。因此，对其预后和预测数据了解有限。

设计：选择克利夫兰诊所在01/01/12-12/31/14之间诊断的HER2ISH组2乳腺癌的患者，分析患者的年龄，肿瘤大小，淋巴结状态，组织学亚型，肿瘤等级，激素受体状态，HER2IHC结果，治疗方案（靶向HER2，细胞毒性，激素和放射疗法）和随访情况。

结果：在研究期间，有40名乳腺癌患者被重新归类为ISH组2（表1）。中位年龄为62岁（平均61岁；范围27-93岁）。中位肿瘤大小为20毫米（平均23毫米;范围5-毫米）;pT1肿瘤占52％。最常见的组织学类型是非特殊类型的浸润性癌（30/40；75％）。33接受淋巴结评估的患者中有12名（36％）表现出淋巴结受累。40例患者中有21例（53％）接受了抗HER2治疗，其中8例接受了新辅助治疗。这8位患者中有3位（40％）达到了病理完全缓解（pCR）。与未使用抗HER2治疗的患者相比，接受HER2靶向治疗的患者更年轻，并且具有更高的组织学分级。但是，这些差异在统计上并不显著（分别为P=0.29和1.0）。使用和未使用抗HER2治疗的患者之间唯一的显著差异是细胞毒性化学疗法的使用（P.）。总体而言，两组的临床结局相似。

结论：ISH第2组肿瘤的稀缺掩盖了我们对此类患者中抗HER2治疗的理解。这项中位随访期为6年的回顾性研究表明，ISH第2组肿瘤患者的临床结局与HER2靶向治疗无关。对我们的队列进行进一步分析并在前瞻性背景下评估患者的预后将提供有价值的数据。

第2代HER2基因蛋白检测法与单独的HER2IHC和ISH检测的比较研究，及其对瘤内异质性的影响

背景：对于伴有瘤内异质性归类为“HER2不确定”的病例，《ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南》强调同时结合HER2IHC和ISH进行HER2状态判断。此外，最近的研究表明，HER2基因和非基因异质性可以预测患者对新辅助HER2靶向治疗的耐药性，表明HER2异质性分析对于患者制定治疗计划具有重要性。本研究开发了第二代HER2基因蛋白测定法（GPA），在一张切片上同时评估HER2蛋白表达和HER2基因状态，然后将HER2GPA与单独的免疫组织化学（IHC）和原位杂交（ISH）进行检验效能分析。

设计：我们设计了一种全自动HER2GPA方法，将采用4B5兔单克隆抗体进行的IHC及与基于寡核苷酸的ISH分析进行结合，检测采用自动染色系统。为了评估GPA的性能，我们将采用HER2GPA的染色结果与单独进行4B5IHC染色及两种获得CEIVD批准的例HER2阳性乳腺癌样本商品化亮视野原位杂交结果进行比较。

结果：GPA的技术性能与仅进行IHC的方法在技术上性能相当，并且优于单独用ISH分析的技术性能。GPA的HER2ISH的总体合格率为％，明显高于两种CEIVD批准的ISH分析方法（分别为88.1％和93.1％）。根据年ASCO/CAP指南进行评分，将IHC结果分为三类（分别为阴性、不确定和阳性），则GPA中的IHC部分和单独的4B5IHC符合率为95.1％。如果IHC与ISH得分存在差异，则ISH结果与GPAIHC得分相符（超过60％的标准IHC得分）。GPA的ISH部分和商品化ISH分析的一致性率为98.9％，而具有差异的病例中，4B5IHC与GPA的ISH结果是一致的。对GPA结果的分析发现，26.7％的病例存在异质性，其中非基因异质性为19.8％，基因异质性为6.9％。

结论：研究证明，GPA在技术上是可靠的，并且与单独的HER2IHC和ISH测定具有高度的一致性。因为GPA可以在细胞水平上同时评估HER2蛋白的表达和基因扩增，所以GPA是鉴定HER2肿瘤内异质性和HER2蛋白与基因不一致病例的有力工具。

译者简介：

王超，医院病理科，主治医师；

广州抗癌协会病理学与分子病理诊断专业委员会委员；

广东省临床医学学会病理学专业委员会青年委员；

广东省中西医结合学会病理学专业委员会委员；

广东省粤港澳合作促进会医药卫生大健康委员会病理联盟会员；

参与“广州消化疾病周”“年中国病理年会”同传翻译工作；

医院访问学者。

杨海峰，医院/广州中医院（医院）病理科主任，病理学主任医师，硕士研究生导师；中华医学会病理学分会乳腺疾病学组委员；年度“CBCS-白求恩中青年医生优才培养计划.乳腺肿瘤学科菁英赛”(MDT团队)全国总决赛冠军；

年度中华医学会病理学分会乳腺疾病学组、中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会“乳腺青年人才群积极表现奖”。

周娜，医院病理科医师，医学硕士；

医院乳腺MDT团队成员；曾参与省部级课题并发表文章。

赵静，副教授，博士，医院病理科；

中国抗癌协会肿瘤病理专委会乳腺学组委员；

美国亚特兰大Emory医院病理科访问学者；

参加年USCAP大会并做壁报展示；

主持国家自然科学基金1项，主持教育部科学基金1项；

发表SCI文章18篇。

梅放，博士，北京大学医学部讲师/医院主治医师；

主攻乳腺病理及内分泌病理（包括甲状腺细针穿刺）；

曾于美国哈佛大医院专科进修；

长期参与国家级及地区级的病理医师规范化专科培训。

（李新军孙利兵张璋编辑）